من عيني يا دوك .................
ال RIA نفس فكرة ال ELISA في الواقع .... ELISA هي تطوير لل RIA
الاختلاف فقط في طريقة ال Detection يعني بدل ال Enz وال Substrate انا هنا عندي Ag بيكون Radioactive بينور لوحده تحت ال Gamma counter ..... لانه طبعا بيطلع اشعة Gamma
الحاجات المطلوبه للتقنيه دي :
اولا
Ag* مشع بسميه Hot Ag ....... غالبا بيكون tyrosine ماسك في Iodine isotope .......
ثانيا :
Antibody ...
. طيب اجيب ال Ab ده ازاي ؟؟
كقاعده عندي المركبات اللي ال Moleculer-Wt بتاعها اكبر من 4000 بتبقى Immune-genic يعني لما احقنها جو كائن حي Animal الجسم هعتبرها ماده غريبه ........يعني وكانها Ag ويطلع لها Ab ....... ال Ab ده بيبقى موجود كده في الSerum بتاع الحيوان وعشان كده بسميه Antisera المهم بفصله من ال Serum ويبقى كده انا جهزت ال Ab
طب لو انا عايز اطلع Ab لماده اصغر من 4000 M.Wt ؟؟؟
اعملها Conjugation مع Large Carrier Molecule .... بسميه Haptens زي الامثله الموجوده عندي دي ....
وبعد كده احقنه في ال Animal .....جسم ال Animal يعمله Ab ...... افصلها عندي ............
جهزت ال Ab
ثالثا ال Ag اللي عايز اكشف عنه اللي هو ال Unknown وبسميه Cold
واخيرا Gamma Counter وده الجهاز اللي هيشوف ال Radioactivity ....
الوقتي كل حاجه جاهزه للشغل ....
هضيف ال Ag اللي عايز اكشف عنه على ال Ab وال.. Ag*
هيحصل بينهم Competition ال Ag وال Ag* على ال Ab طبعا كل ما كمية ال Ag بتاعي تزيد هتعمل Displace لل Ag* من مكانه ....
دلوقتي انا عندي لو تخيلت التفاعل ده كانه في اناء في Liquid ..... ال Ab موجود في قعر الاناء ....وعليه شوية Ag* يعني ليه Radioactivity
وفي نفس الوقت ال Ag* اللي حصله Displacement من مكانه هيطفو على السطح Supernatant وبرده ليه Radioactivity
هنا هقيس ال radioactivity بتاعة الاتنين ... القعر والسطح واللي هي هتستاوي ال Free A*g على السطح وال Bound A*g في القعر
بقسم الاتنين على بعض bound / free هيديني رقم معين او نسبه معينه يعني ......
طبعا انا ممكن باستخدام Standard Ag اقدر اعمل كل اللي فات وارسم Curve بين النسب bound/ free وكمية
ال Unlabeled == cold standard Ag
من على ال Curve standard ده ...اطبق بقه النسبه اللي طلعتلي فوق في التجربه بتاعتي على محور الصادات واقدر اعرف منها كمية ال Unbound cold Ag اللي هي العينه على محور السينات ........... ..
اسف على الاطاله ............. وبالتوفيق
التعديل الأخير تم بواسطة Dr Deya ; 29-06-2011 الساعة 06:49 PM
شكرا د.ضياء علي المجهود الكبير ده...لك تحياتي..
نسيت اقول بس ان التناسب هيكون عكسي .....
لان كل ما ال Ad يزيد هيعمل Displace لل Ag* من مكانه وبالتالي ال Bound هيقل وال free هيزيد عني البسط هيقل والمقام هيزيد ... في النسبه يعني .......... وبالتالي النسبه هتكون اقل .... ...
وبالتالي يكون التناسب عكسي ما بين النسبه bound/free و ال Cold Ag
ربنا يوفقك يا دكتور ضياء ، شكرا على الشرح
ألف ألف شكر يا د/ضياء .... جزاك الله خير
تفائلوا بالخير .......... تجدوه ...
اللهم لا سهل إلا ما جعلته سهلا وأنت تجعل الحزن إذا شئت سهلاً
اللهم يا معلم ابراهيم علمنا ويا مفهم سليمان فهمنا ... سبحانك ... لا علم لنا الا ما علمتنا انك انت العيلم الحكيم
اللهم امين .........................
بالتوفيق جميعا ان شاء الله.